Diabetologia：激活但功能受到破坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现肝细胞自身抗纤到浮现1型号高血压医学病因的重大突破百余人在孩童初期就有很好的叙述，多个肝细胞自身抗纤之中性的孩童之中有70%在血清转成后10年内患上高血压，而随访15年的孩童这一比例减低到84%。比起之下，分之一医学1型号高血压一半以上的型号1型号高血压的发作功能还没有人得到充分的学术研究。

越来越多的人开始使用分期该系统来假定1型号高血压的重大突破：个纤在浮现多种肝细胞自身抗纤时进入第1阶段性，浮现血糖异常时进入第2阶段性，浮现病因时进入第3阶段性。一些多发肝细胞自身抗纤之中性的个纤，在1期和2期，重大突破较慢，并演进为发作的1型号高血压。我们前叙述了一四组在首次侦测到多种肝细胞自身抗纤样本后至较少10年无高血压的近于慢重大突破者，这四组病患者人数较少，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身蛋白质依赖性CD8+T细胞内质子化在重大突破快速的病患者之中基本不存在，但在现阶段性发作和长期存在的高血压病患者之中很容易侦测到。这有可能暗示，与重大突破病患者比起，这些病患者自身免疫质子化的可调强化。

早期学术研究暗示，尽管可调性T细胞内(Treg)量正常人，但高血压病患者存在一些新功能缺陷，其之中包括对IL-2的质子化能力减少。此外，高血压病患者之中的物理现象CD4+T细胞内有可能对可调近于富抵抗性，表现为物理现象T细胞内的可抑制移向，自然激发的Treg和纤外激发的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞内之中IL-2质子化移向。本学术研究的目的是叙述了CD4+可调性T细胞内(Treg)在一小群近于快速重大突破者之中的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

步骤：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁以下确诊的病患者亲属之中检查1型号高血压的危险因素。我们前叙述了长期快速重大突破者的特征，他们保持多重肝细胞自身抗纤之中性超过10年，但没有人浮现高血压的医学病因，慢性或非同步短暂性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量血液样本的快速重大突破者扩及T和B细胞内新功能分析。在目前的学术研究之中，8名慢重大突破者(SP四组)，之中位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身抗纤之中性。所有的发起者都处于1型号高血压重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗纤对某些蛋白质的之中性质子化，然而，一名病患者已经处于2期至较少6年，但没有人浮现医学病因，一名病患者被病患为高血压，该测试者72岁，在野外试验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之中对该供纤同步进行了分开评估。分离外周血单个反应器细胞内(PBMCs)，引入多常量流式细胞内术和T细胞内可抑制试验评估供纤之中Treg的kHz、表现型号和新功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类反应器对、表征和复归)同步进行无指导聚类分析，评估Treg表现型号。

结果：与健康供纤比起，来自慢重大突破纤的梦境CD4+T细胞内的指导聚类推断，激已逝的梦境CD4+ TregkHz减低，与可抑制作用诱导的TNFR方面蛋白质(GITR)理解减低有关。一名HbA1c下降的病患者与重大突破快速者和比如说的对应四组比起，Treg谱不尽相同。新功能分析暗示，与健康供纤比起，来自快速重大突破纤的Treg酪氨酸的CD4+物理现象T细胞内可抑制值得注意受损。表现为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134理解的可抑制减低。

绘出1 深入的表现型号分析推断，CD4+Treg非典型号在慢重大突破数据流之中减低。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有供纤的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物理解反应器对借助于10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)使用9个不同Treg上标转化成的10个元簇的MST。每个键值代表一个战斗群(100个战斗群)，更是大的元战斗群(10个元战斗群)在键值四组周围上色。每个键值之中的饼绘出透露单个上标的理解级别。(b)每个元聚类的热绘出，以推断整纤上标理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化成绘出，以及FlowSOM辨认的每个元簇的基岩。(e-l)一般来说反应器素为每个metacluster箱示意绘出(反应器素> 0.05%)确定为HD和SP四组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。紫色圆圈代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 使用CITRUS的外推证实，TregkHz的减低是重大突破快速的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)四组以及供纤SP 606(紫色)之中CD25+ cd127的kHz汇总绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控长可数的箱示意绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)果树簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度著色，箭头突借助于的簇被辨认为SP和HD数据流之间的不同。(j)箱示意绘出推断了在SP(黑斑)和HD(灰点)四组之中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的一般来说反应器素(比例)。(k)直方绘出推断每个簇的表现型号(粉色)和Treg上标一般来说理解与剧中理解(红色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。剧中与所有其他簇之中上标的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与健康献血者比起，重大突破快速者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个理解上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的理解热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR理解并联，推断直方绘出(c)和汇总绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有供纤包括，p< 0.05(红色)供纤SP 606和比如说的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)并联，推断直方绘出(e)和汇总绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自快速重大突破的CD4+ treg细胞内控制物理现象CD4+T细胞内的能力减少。SP四组用红色的直通和圆圈透露，HD四组用白色的直通和圆圈透露，紫色的直通/圆圈透露供纤sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，培养3天后同步进行流式细胞内术侦测。(a-d)与CD4+这样的话者一般来说应的treg培养(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比例。使用之中性对应(激已逝的响应细胞内不含treg)计算可抑制比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 物理现象CD4+T细胞内对快速重大突破的T细胞内已逝化的可抑制更是敏感。SP四组用红色的直通和圆圈透露，HD四组用白色的直通和圆圈透露，紫色的直通/圆圈透露供纤sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化细胞内，培养3天后同步进行流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因长子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制%-(b)。(c,d) CD25可抑制%-(c)和CD134可抑制%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计之中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得借助于的论证是，来自快速重大突破长子的已逝化梦境CD4+Treg在GITR理解之中得到了扩展和丰富，强调了更是进一步学术研究Treg在1型号高血压有可能会个纤之中的举例来说的必要性。

注解借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28